Hvad er Isoelektrisk fokusering?

Isoelektrisk fokusering (IEF), også kaldet Elektrofokuseringskammer, er et middel til at separere molekyler baseret på forskellene i deres elektriske ladning. Det er en type af elektroforese, et fænomen, hvor partikler kan dispergeres i fluidet ved anvendelse af et konstant elektrisk felt. I levende celler, isoelektrisk fokusering forekommer naturligt, men det er ofte genskabt i laboratoriet ved hjælp af proteiner suspenderet i en gel.

Evnen til at separere molekyler i isoelektrisk fokusering er baseret på en forståelse af pH-niveauet af forskellige proteiner. Proteiner kan have en pH-værdi mellem 1 og 12. Den nettoladning af et protein vil blive bestemt af pH-niveauet af det lokale miljø. For eksempel kan et protein have en neutral, positiv eller negativ nettoladning baseret på pH af omgivelserne.

Nettoladning helst protein er summen af ​​dets positive og negative ladninger. Dette bestemmes af, hvorvidt de aminosyrer kæder, der udgør proteinet er sure eller basiske. Når der er mere sure grupper end basiske grupper, vil den resulterende pH være lav, eller sure. Når der er mere basiske grupper end sure grupper, vil den resulterende pH være høj, eller basisk. De fleste proteiner vil have en pH-værdi på 3-12, med en stor koncentration i området 4-7.

Proteiner er positivt ladede, når de er i en opløsning, der har en pH-værdi lavere end selve proteinet. De vil have en negativ ladning, når pH-værdien af ​​opløsningen har en pH-værdi højere end deres egen pH. Derfor er pH-niveauet af protein kaldet isoelektriske punkt af proteinet. Isoelektrisk fokusering opstår, når proteinets miljø manipuleres ved hjælp af et elektrisk felt.

Når et elektrisk felt påføres på proteinets miljø, vil det påvirke, hvordan partiklerne i proteinet opfører sig. Dette betyder, at når proteinet udsættes for et miljø, der er i samme pH-niveau, som i sig selv, vil partiklerne i proteinet ikke bevæge sig. Men når proteinet underkastes et miljø, der har en lavere pH-værdi end sig selv, vil partiklerne bevæge sig mod katoden. Hvis proteinets miljø har en højere pH-værdi end sin egen, vil partiklerne bevæge sig mod anoden. Isoelektrisk fokusering kræver manipulation af proteinets miljø, så at dets partikler bevæger sig i den ønskede retning.


© 2020 Zajacperrone.com | Contact us: webmaster# zajacperrone.com